<source id="vzgb5"></source>

  1. 收藏本站
    《遵義醫科大學》 2019年
    收藏 | 手機打開
    二維碼
    手機客戶端打開本文

    豬帶絳蟲Ts14-3-3基因家族鑒定、表達及Ts14-3-3.3蛋白組織定位研究

    李想  
    【摘要】:目的:生物信息學分析和預測豬帶絳蟲(Taenia solium,Ts)14-3-3基因家族及其編碼蛋白的序列、結構與進化特征,分析Ts14-3-3基因家族在豬帶絳蟲成蟲和囊尾蚴階段的表達差異,原核表達Ts14-3-3.3基因并制備Ts14-3-3.3多克隆抗體,分析Ts14-3-3.3蛋白的組織定位情況,為該蛋白的進一步研究奠定基礎。方法:1.搜索Gene DB數據庫中豬帶絳蟲全基因組數據,利用生物信息學分析工具及各類軟件包,分析和預測Ts14-3-3基因家族的基因結構及其編碼蛋白質的理化特性、二級結構、亞細胞定位、三級結構和系統進化樹等。2.采集流行區豬帶絳蟲病人成蟲標本,建立囊蟲病豬模型,收集豬囊尾蚴,采用實時熒光定量PCR方法檢測Ts14-3-3基因家族在豬帶絳蟲成蟲和囊尾蚴階段的相對表達量。3.將Ts14-3-3.3基因克隆至原核表達質粒p CznⅠ中,在大腸桿菌Arctic Express中用異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達,通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析其表達產物,用His Link親和層析柱進行純化,免疫印跡法(Western blot)鑒定純化后的Ts14-3-3.3重組蛋白。4.將純化的Ts14-3-3.3重組蛋白免疫新西蘭兔,制備Ts14-3-3.3多克隆抗體,Western blot和免疫組化法檢測Ts14-3-3.3天然蛋白在豬帶絳蟲成蟲和囊尾蚴的定位。結果:1.通過對豬帶絳蟲全基因組數據庫搜索,共獲得6個豬帶絳蟲Ts14-3-3基因,基因結構均由外顯子和內含子組成,其編碼蛋白分子質量介于26.88~29.33KD之間,蛋白結構均為二聚體形式,分別位于4個不同的進化枝上。2.熒光定量PCR結果表明,6個Ts14-3-3基因在豬帶絳蟲成蟲和囊尾蚴階段均有表達,Ts14-3-3.1、Ts14-3-3.2、Ts14-3-3.3和Ts14-3-3.4在囊尾蚴階段表達量較高,Ts14-3-3.5和Ts14-3-3.6在成蟲階段表達量較高。3.成功構建豬帶絳蟲重組表達質粒p CznⅠ-Ts14-3-3.3,經IPTG誘導表達,獲得以可溶性形式高效表達的Ts14-3-3.3重組蛋白,分子質量約29.31 KD,純化后帶有His標簽的Ts14-3-3.3重組蛋白能被抗血清所識別。4.用純化的Ts14-3-3.3重組蛋白免疫新西蘭兔,獲得了高效價的Ts14-3-3.3多克隆抗體,Western blot和免疫組化結果顯示,Ts14-3-3.3天然蛋白在豬帶絳蟲成蟲和囊尾蚴中均有表達。結論:1.初步獲得了豬帶絳蟲Ts14-3-3基因家族的6個成員,其編碼蛋白包含典型的14-3-3蛋白結構域,具有較高的序列保守性。2.豬帶絳蟲Ts14-3-3基因家族的6個成員在豬帶絳蟲成蟲和囊尾蚴階段均有表達。3.成功構建p Czn I-Ts14-3-3.3原核表達質粒,Ts14-3-3.3重組蛋白可在大腸桿菌中以可溶形式高效表達。4.Ts14-3-3.3天然蛋白在豬帶絳蟲成蟲和囊尾蚴階段均有表達。
    【學位授予單位】:遵義醫科大學
    【學位級別】:碩士
    【學位授予年份】:2019
    【分類號】:S852.734;R383.3

    【相似文獻】
    中國碩士學位論文全文數據庫 前1條
    1 李想;豬帶絳蟲Ts14-3-3基因家族鑒定、表達及Ts14-3-3.3蛋白組織定位研究[D];遵義醫科大學;2019年
    中國知網廣告投放
     快捷付款方式  訂購知網充值卡  訂購熱線  幫助中心
    • 400-819-9993
    • 010-62791813
    • 010-62985026


    狠狠射狠狠色在线视频